كيفية قطع وقت الرحلان الكهربائي للحمض النووي إلى 10 دقائق؟

الرحلان الكهربائي للأحماض النووية غالبا ما يكون أبطأ مما يجب - يسرق الوقت، ويسخن الجل بشكل مفرط، ويؤخر اتخاذ القرارات في المختبرات المزدحمة.

الألم: لماذا تستغرق المواد الهلامية وقتا طويلا

معظم الفرق تقبل الجري الذي يستمر من 30 إلى 60 دقيقة ك"عادي". لكن المدى الطويل يخفي تكاليف حقيقية. الحرارة تتراكم، وتتلاشى النطاقات، وتفقد الوقت بين PCR والخطوة التالية. لم تصمم مخازن TAE/TBE الكلاسيكية للسرعة عند شدة المجال الأعلى. ادفع الجهد ويسخن الهلام؛ إذا طال الاستمرار ستخاطر بالهجرة المشوهة أو ضعف التعافي. إعادة تشغيل جل لإصلاح التلطيخ تكلف أكثر من دقائق - فهذا يقلل من الثقة بالنفس ويسد سير العمل.

من خلال المحادثات مع العملاء، نسمع نفس نقاط الألم مرارا وتكرارا. يريد الباحثون فحوصات أسرع لمنتجات PCR، وشاشات عالية الإنتاجية لا تتوقف، وأحزمة نظيفة يمكن أن تذهب مباشرة إلى الربط أو استعادة الجل. المشتريات تريد مستلزمات استهلاكية تدوم ولا تتطلب استبدالا مستمرا. في شركة لونغلايت تكنولوجي، طرحنا سؤالا بسيطا: ماذا لو كان بالإمكان الانتهاء من الرحلان الكهربائي للأحماض النووية بشكل موثوق خلال 5 إلى 10 دقائق دون التضحية بالأداء في مرحلة ما بعد التيار؟

❓ ماذا تخبرنا المختبرات؟

ارتفاع درجة الحرارة، وعدم ثبات قوة المخزن بين الإلقاء والجري، والقلق من الخطوات التالية يحد من السرعة. تتردد الفرق في تغيير المخازن لأنهم يقلقون بشأن الربط، أو عائد الاستخراج، أو استقرار الحمض النووي الريبي. لا يجب أن تختار بين السرعة والجودة.

(فيجوإعادة 1. تطبيق عازلة فائقة السرعة على جل الاغاروز 0.8٪. المسار 1: D12000

سلم (5 ميكرولتر) ؛ الممر 2: 4 ميكرولتر ؛ الممر 3: 3 ميكرولتر ؛ حارة 4: 2 ميكرولتر ؛ الممر 5: 1 ميكرولتر)

(شكل 2. تطبيق المخزن المؤقت فائق السرعة على

1٪ جل الاغاروز. المسار 1: سلم D5000 (5 ميكرولتر) ؛ الممر 2: 4 ميكرولتر ؛ الممر 3: 3 ميكرولتر ؛ حارة 4: 2 ميكرولتر ؛ الممر 5: 1 ميكرولتر)

(الشكل 3. تطبيق المخزن المؤقت فائق السرعة على

2٪ جل الاغاروز. المسار 1: سلم D1000 (5 ميكرولتر) ؛ الممر 2: 4 ميكرولتر ؛ الممر 3: 3 ميكرولتر ؛ حارة 4: 2 ميكرولتر ؛ حارة 5: 1 ميكرولتر.)

• المخزن المؤقت فائق السرعة متوافق تماما مع تركيزات مختلفة من المواد الهلامية للاغاروز (0.8٪ ، 1٪ ، 2٪) ، كما هو موضح في الشكل 1-3. بغض النظر عن تركيز الهلام ، تحافظ نطاقات الحمض النووي على دقة ووضوح ممتازين ، مما يضمن الاحتياجات التجريبية لفصل جزيئات الحمض النووي ذات الأحجام المختلفة.

الإصلاح: شرح المخزن المؤقت فائق السرعة

لدينا 50x مخزن مؤقت فائق السرعة هي تركيبة منخفضة القوة بالأيونات مصممة خصيصا لتحليل الرحلان الكهربائي بحمض الأغاروز. الحمل الأيوني الأقل يعني حرارة أقل في حقل معين. إذا قرنته بتركيز الأغاروز الصحيح، يمكنك العمل بثقة حتى 25 - 30 فولت/سم، مما يضغط الركض الذي غالبا ما يستغرق 30 دقيقة إلى 5 - 10 دقائق فقط. في الاستخدام المباشر، عادة ما تشهد الفرق فواصل أسرع ~2.5 - 3 مرات مقارنة ب 1x TAE أو 1x TBE القياسية.

كيف تعمل

تقلل قوة الأيونات المنخفضة من تسخين الجول وتساعد في الحفاظ على أشرطة حادة بجهد أعلى. يحافظ هذا الاستقرار الحراري على دقة الحمض النووي والحمض النووي الريبي مع تمكين السرعة. بنفس القدر من الأهمية ، فإن الكيمياء صديقة للمصب ، فهي لا تتداخل مع استخراج هلام الحمض النووي أو ربطه ، لذا يمكنك الانتقال مباشرة إلى الاستنساخ أو التنظيف أو الكمية.

• الدوران السريع: الجولات من 5 إلى 10 دقائق عند 25 - 30 فولت/سم

• العصابات الحادة: دقة عالية حتى في ظل قوة المجال العالية

• التوافق النهائي: لا يوجد تأثير على استعادة الجل أو ربطه

• استرداد أعلى: يتجاوز بشكل متكرر أداء استرداد TAE / TBE

• سعة عازلة قابلة لإعادة الاستخدام: تخزين مؤقت قوي للاستخدامات المتعددة

• الإعداد السريع

قم بتخفيف المخزن بنسبة 1:50 لتحضير محلول يعمل 1x (مثلا، 20 مل من 50x في ماء مقطر بسعة 980 مل). خزن القرص 1x في درجة حرارة الغرفة. للحصول على أفضل قوام، استخدم نفس الدفعة من 1x للصب وتشغيل الجل؛ خلط دفعات مختلفة يمكن أن يغير قوة المخزن عند واجهة الجل. لا تخفف الكمية أقل من 1x - فهذا يدعو إلى هجرة غير طبيعية.

ظروف التشغيل

شغل الجل بطول 25 - 30 فولت/سم وضبط الجل حسب هندسة الحوض وسلوكك الحراري. كما هو الحال مع أي جولة عالية الميدان، تأكد من حدود مزود الطاقة لديك؛ إذا انخفض التيار أو الجهد، تحقق مما إذا كانت الآلة تقييد التيار أو الطاقة. التلوين مرن: أضف صبغة إلى الجل أو الصبغة بعد الجري - كلاهما يعمل.

• السلامة والاستقرار

يمكن أن يؤدي التشغيل المستمر أو درجات الحرارة المحيطة المرتفعة إلى رفع درجة حرارة العازلة. إذا لزم الأمر ، قم بتبريد الوحدة أو ضعها على الثلج لحماية الدقة. استبدل المخزن المؤقت بشكل دوري للحفاظ على الدقة. قم بتخزين كل من حلول العمل 50x و 1x في درجة حرارة الغرفة ؛ في ظل الظروف الموصى بها ، يكون الاستقرار 12 شهرا على الأقل من الاستلام. كما هو الحال دائما ، ارتد معطف مختبر وقفازات يمكن التخلص منها. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي من قبل المتخصصين.

مكاسب العالم الحقيقي وكيف تبدأ

عندما تكون السرعة موثوقة، يتحسن كل شيء في المراحل التالية. جل مدته 5 إلى 10 دقائق يسمح لك بفحص PCR، تعديل تحضير المكتبة، أو التحقق من الربط دون أن يفسد اليوم. للمجموعات ذات الإنتاجية العالية، الجل الأسرع يفتح طوابير الانتظار ويزيد من معدل الإنتاجية. وهذا يعني المزيد من البيانات قبل الغداء - وعدد أقل من الإعادات المسائية.

في Longlight Technology ، قمنا ببناء هذا المخزن المؤقت لمساعدة الفرق على تقصير الحلقة بين الفرضية والنتيجة. في عمليات النشر التجريبية ، أبلغت المختبرات عن نطاقات أنظف في الحقول العليا ، وعمليات تسليم أكثر سلاسة للربط ، وتحسين إنتاجية استخراج الهلام مقارنة بالمخازن المؤقتة القديمة. تدعم قابلية إعادة الاستخدام وتنسيق 50x المركز أيضا التحكم في التكاليف: زجاجة واحدة تقطع شوطا طويلا ، وتعني سعة المخزن المؤقت القوية عددا أقل من المقايضات في منتصف التشغيل.

أفضل الممارسات للرحلان الكهربائي السريع للحمض النووي

• يلقي ويعمل بنفس الدفعة 1x من أجل الاتساق.

• ابدأ من 25 فولت / سم ، ثم تحرك نحو 30 فولت / سم كما يسمح الإعداد الخاص بك.

• مراقبة درجة حرارة العازلة على تسلسلات أطول من التشغيل. تبرد حسب الحاجة.

• حافظ على الجهد أقل من 200 فولت إذا قمت بإسقاط جل مصبوب TAE / TBE في المخزن المؤقت السريع ؛ يمكن أن تؤدي الفولتية العالية جدا إلى تشويه النتائج في هذا السيناريو.

• حيث يضيء

عمليات التحقق القصيرة ، والفحوصات السريعة أثناء الاستنساخ ، وفحص العشرات من مكبرات PCR ، وتسريع سير عمل الحمض النووي الريبي التي تزحف عادة في ظل الأنظمة التقليدية. إذا كان فريقك يقضي وقتا أطول في انتظار المواد الهلامية بدلا من التصرف بناء على النتائج ، فإن المكاسب تكون فورية.

أفكار فينا

هل أنت مستعد لتقليل وقت الرحلان الكهربائي للحمض النووي إلى 10 دقائق - دون التخلي عن الوضوح أو التعافي؟ تحدث إلى Longlight Technology اليوم لطلب عينة، أو الحصول على نموذج SOP، أو مراجعة التوافق مع صندوق الجل الخاص بك. دعونا نحول الهروب من عنق الزجاجة إلى نقطة تفتيش سريعة ونواصل تجاربك مستمرة.