كيفية قطع وقت الرحلان الكهربائي للحمض النووي إلى 10 دقائق؟

غالبا ما يكون الرحلان الكهربائي للحمض النووي أبطأ مما يجب أن يكون - سرقة الوقت ، وارتفاع درجة حرارة المواد الهلامية ، وتأخير القرارات في المختبرات المزدحمة.

الألم: لماذا تستغرق المواد الهلامية وقتا طويلا

تقبل معظم الفرق الجري من 30 إلى 60 دقيقة على أنها "طبيعية". لكن المدى الطويل يخفي التكاليف الحقيقية. تتراكم الحرارة ، وتضمس النطاقات ، وتضيع الوقت بين تفاعل البوليميراز المتسلسل والخطوة التالية. لم يتم تصميم المخازن المؤقتة الكلاسيكية TAE / TBE للسرعة عند شدة المجال الأعلى. ادفع الجهد ويسخن الجل ؛ ادفع لفترة أطول وستخاطر بالهجرة المشوهة أو ضعف الانتعاش. إعادة تشغيل الجل لإصلاح التلطيخ يكلف أكثر من دقائق - يقلل من الثقة ويسد سير عملك.

من المحادثات مع العملاء ، نسمع نفس نقاط الألم مرارا وتكرارا. يريد الباحثون فحوصات أسرع لمنتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل ، وشاشات عالية الإنتاجية لا تتوقف ، وأشرطة نظيفة يمكن أن تذهب مباشرة إلى الربط أو استعادة الجل. تريد المشتريات مواد استهلاكية تدوم ولا تتطلب استبدالا مستمرا. في Longlight Technology ، طرحنا سؤالا بسيطا: ماذا لو كان من الممكن الانتهاء من الرحلان الكهربائي للحمض النووي بشكل موثوق في غضون 5-10 دقائق دون التضحية بأداء المصب؟

❓ ماذا تخبرنا المختبرات؟

ارتفاع درجة الحرارة ، وقوة المخزن المؤقت غير المتسقة بين الصب والجري ، والقلق بشأن خطوات المصب تحد من السرعة. تتردد الفرق في تغيير المخازن المؤقتة لأنها قلقة بشأن الربط أو عائد الاستخراج أو استقرار الحمض النووي الريبي. لا يجب أن تختار بين السرعة والجودة.

(فيجوإعادة 1. تطبيق عازلة فائقة السرعة على جل الاغاروز 0.8٪. المسار 1: D12000

سلم (5 ميكرولتر) ؛ الممر 2: 4 ميكرولتر ؛ الممر 3: 3 ميكرولتر ؛ حارة 4: 2 ميكرولتر ؛ الممر 5: 1 ميكرولتر)

(شكل 2. تطبيق المخزن المؤقت فائق السرعة على

1٪ جل الاغاروز. المسار 1: سلم D5000 (5 ميكرولتر) ؛ الممر 2: 4 ميكرولتر ؛ الممر 3: 3 ميكرولتر ؛ حارة 4: 2 ميكرولتر ؛ الممر 5: 1 ميكرولتر)

(الشكل 3. تطبيق المخزن المؤقت فائق السرعة على

2٪ جل الاغاروز. المسار 1: سلم D1000 (5 ميكرولتر) ؛ الممر 2: 4 ميكرولتر ؛ الممر 3: 3 ميكرولتر ؛ حارة 4: 2 ميكرولتر ؛ حارة 5: 1 ميكرولتر.)

• المخزن المؤقت فائق السرعة متوافق تماما مع تركيزات مختلفة من المواد الهلامية للاغاروز (0.8٪ ، 1٪ ، 2٪) ، كما هو موضح في الشكل 1–3. بغض النظر عن تركيز الهلام ، تحافظ نطاقات الحمض النووي على دقة ووضوح ممتازين ، مما يضمن الاحتياجات التجريبية لفصل جزيئات الحمض النووي ذات الأحجام المختلفة.

الإصلاح: شرح المخزن المؤقت فائق السرعة

نا 50x مخزن مؤقت فائق السرعة هي تركيبة منخفضة القوة مصممة خصيصا للرحلان الكهربائي لحمض الاغاروز النووي. الحمل الأيوني الأقل يعني حرارة أقل في حقل معين. قم بإقرانها بتركيز الاغاروز الصحيح ويمكنك العمل بثقة حتى 25 - 30 فولت / سم ، وضغط الجري الذي يستغرق غالبا 30 دقيقة إلى 5-10 دقائق فقط. في الاستخدام وجها لوجه ، ترى الفرق عادة فواصل أسرع ~ 2.5 - 3x من 1x TAE أو 1x TBE القياسية.

كيف تعمل

تقلل قوة الأيونات المنخفضة من تسخين الجول وتساعد في الحفاظ على أشرطة حادة بجهد أعلى. يحافظ هذا الاستقرار الحراري على دقة الحمض النووي والحمض النووي الريبي مع تمكين السرعة. بنفس القدر من الأهمية ، فإن الكيمياء صديقة للمصب ، فهي لا تتداخل مع استخراج هلام الحمض النووي أو ربطه ، لذا يمكنك الانتقال مباشرة إلى الاستنساخ أو التنظيف أو الكمية.

• التحول السريع: 5 - 10 دقائق من الجري بسرعة 25 - 30 فولت / سم

• العصابات الحادة: دقة عالية حتى في ظل قوة المجال العالية

• التوافق النهائي: لا يوجد تأثير على استعادة الجل أو ربطه

• استرداد أعلى: يتجاوز بشكل متكرر أداء استرداد TAE / TBE

• سعة عازلة قابلة لإعادة الاستخدام: تخزين مؤقت قوي للاستخدامات المتعددة

• الإعداد السريع

قم بتخفيف المخزن المؤقت 1:50 لتحضير محلول عمل 1x (على سبيل المثال ، 20 مل من 50x في 980 مل من الماء المقطر). قم بتخزين 1x في درجة حرارة الغرفة. للحصول على أفضل تناسق ، استخدم نفس الدفعة من 1x لصب الجل وتشغيله ؛ يمكن أن يؤدي خلط دفعات مختلفة إلى تغيير قوة المخزن المؤقت في واجهة الجل. لا تخفف أقل من 1x – التي تدعو إلى هجرة غير طبيعية.

ظروف التشغيل

قم بتشغيل 25-30 فولت / سم من طول الجل واضبطه بناء على هندسة الخزان والسلوك الحراري. كما هو الحال مع أي تشغيل عالي المجال ، قم بتأكيد حدود إمدادات الطاقة الخاصة بك ؛ إذا انجرف التيار أو الجهد إلى أسفل ، فتحقق مما إذا كان الجهاز يغد التيار أو الطاقة. التلوين مرن: أضف صبغة إلى الجل أو وصمة عار بعد الجري - كلاهما يعمل.

• السلامة والاستقرار

يمكن أن يؤدي التشغيل المستمر أو درجات الحرارة المحيطة المرتفعة إلى رفع درجة حرارة العازلة. إذا لزم الأمر ، قم بتبريد الوحدة أو ضعها على الثلج لحماية الدقة. استبدل المخزن المؤقت بشكل دوري للحفاظ على الدقة. قم بتخزين كل من حلول العمل 50x و 1x في درجة حرارة الغرفة ؛ في ظل الظروف الموصى بها ، يكون الاستقرار 12 شهرا على الأقل من الاستلام. كما هو الحال دائما ، ارتد معطف مختبر وقفازات يمكن التخلص منها. هذا المنتج مخصص للاستخدام البحثي من قبل المتخصصين.

مكاسب العالم الحقيقي وكيف تبدأ

عندما تكون السرعة موثوقة ، يتحسن كل شيء في اتجاه مجرى النهر. يتيح لك الجل لمدة 5 إلى 10 دقائق فحص تفاعل البوليميراز المتسلسل أو ضبط إعداد المكتبة أو التحقق من صحة الربط دون إخراج اليوم عن مساره. بالنسبة للمجموعات عالية الإنتاجية ، تعمل المواد الهلامية الأسرع على فك انسداد قوائم الانتظار وزيادة الإنتاجية. وهذا يعني المزيد من البيانات قبل الغداء - وعدد أقل من الإعادة المسائية.

في Longlight Technology ، قمنا ببناء هذا المخزن المؤقت لمساعدة الفرق على تقصير الحلقة بين الفرضية والنتيجة. في عمليات النشر التجريبية ، أبلغت المختبرات عن نطاقات أنظف في الحقول العليا ، وعمليات تسليم أكثر سلاسة للربط ، وتحسين إنتاجية استخراج الهلام مقارنة بالمخازن المؤقتة القديمة. تدعم قابلية إعادة الاستخدام وتنسيق 50x المركز أيضا التحكم في التكاليف: زجاجة واحدة تقطع شوطا طويلا ، وتعني سعة المخزن المؤقت القوية عددا أقل من المقايضات في منتصف التشغيل.

أفضل الممارسات للرحلان الكهربائي السريع للحمض النووي

• يلقي ويعمل بنفس الدفعة 1x من أجل الاتساق.

• ابدأ من 25 فولت / سم ، ثم تحرك نحو 30 فولت / سم كما يسمح الإعداد الخاص بك.

• مراقبة درجة حرارة العازلة على تسلسلات أطول من التشغيل. تبرد حسب الحاجة.

• حافظ على الجهد أقل من 200 فولت إذا قمت بإسقاط جل مصبوب TAE / TBE في المخزن المؤقت السريع ؛ يمكن أن تؤدي الفولتية العالية جدا إلى تشويه النتائج في هذا السيناريو.

• حيث يضيء

عمليات التحقق القصيرة ، والفحوصات السريعة أثناء الاستنساخ ، وفحص العشرات من مكبرات PCR ، وتسريع سير عمل الحمض النووي الريبي التي تزحف عادة في ظل الأنظمة التقليدية. إذا كان فريقك يقضي وقتا أطول في انتظار المواد الهلامية بدلا من التصرف بناء على النتائج ، فإن المكاسب تكون فورية.

أفكار فينا

هل أنت مستعد لخفض وقت الرحلان الكهربائي للحمض النووي إلى 10 دقائق - دون استبدال الوضوح أو الانتعاش؟ تحدث إلى Longlight Technology اليوم لطلب عينة أو الحصول على نموذج SOP أو مراجعة التوافق لصندوق الجل الخاص بك. دعنا نحول الجل من الاختناقات إلى نقطة تفتيش سريعة ونحافظ على استمرار تجاربك.